標(biāo)準(zhǔn)菌株的活化方法你知道嗎？

標(biāo)準(zhǔn)菌株的活化方法

實(shí)驗(yàn)室必須保存有滿足試驗(yàn)需要的標(biāo)準(zhǔn)菌種/菌株，除檢測(cè)方法（如藥物敏感試驗(yàn)、抗菌性能測(cè)試）中規(guī)定的菌株外，還應(yīng)包括應(yīng)用于培養(yǎng)基（試劑）驗(yàn)收/質(zhì)量控制、方法確認(rèn)/證實(shí)、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、人員培訓(xùn)考核和結(jié)果質(zhì)量的保證等所需的菌株。并且標(biāo)準(zhǔn)菌種必須從認(rèn)可的菌種或標(biāo)本收集途徑獲得。

▲CNAS-CL09-2013《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用說明》

常用標(biāo)準(zhǔn)菌種來源

美國(guó)菌種保藏中心ATCC

英國(guó)國(guó)家典型菌株保藏中心NCTC

中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心CMCC

中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心CICC

▲ ATCC菌株和CICC標(biāo)準(zhǔn)菌種的常見包裝形式

接下來一起了解下標(biāo)準(zhǔn)菌株的活化方法

ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌種KWIK-STIKTM產(chǎn)品的活化說明

將KWIK-STIKTM產(chǎn)品平衡至室溫，撕開袋子。取出菌種管，揭下標(biāo)簽上可撕取部分，貼于原始培養(yǎng)皿或QC記錄本上。捏碎管帽處的安瓿，使其釋放出液體，將管子直立以使液體流入管底。擠壓管底的菌球，使之與液體混合，以形成均勻的菌懸液。將棉簽浸于菌懸液中，并于培養(yǎng)皿約三分之一范圍內(nèi)輕輕擠壓并旋轉(zhuǎn)涂抹。使用無菌接種環(huán)進(jìn)行三區(qū)或四區(qū)劃線，以盡可能分離出單菌落。隨即在適合的溫度和條件下倒置培養(yǎng)已接種的原始培養(yǎng)皿。按照適宜的生物危害品處置方法（如121℃高壓30 min），丟棄菌種管。

▲ ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株KWIK-STIKTM產(chǎn)品操作說明

CICC標(biāo)準(zhǔn)菌種的操作說明

使用酒精棉球擦拭凍干菌種管表面進(jìn)行消毒。將凍干管頂端置于酒精燈火焰上均勻加熱約1~2分鐘。立即滴2~3滴無菌水于加熱部位，使管壁破裂。使用鑷子或剪刀敲擊裂痕處，將管頂端敲落。吸取約0.5mL液體培養(yǎng)基于凍干管中，將凍干菌粉充分溶解。取0.2mL菌懸液轉(zhuǎn)移至裝有5mL~8mL液體培養(yǎng)基的試管中混勻，并取0.1mL菌懸液轉(zhuǎn)移至平板培養(yǎng)基上，進(jìn)行劃線分離。將液體培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基置于合適條件下培養(yǎng)。按照適宜的生物危害品處置方法（如121℃高壓30 min），丟棄菌種管。

注：也可使用砂輪在凍干管頂端打磨出裂痕，再使用鑷子或剪刀將管頂端敲落。

▲ CICC標(biāo)準(zhǔn)菌株的打管方式

菌株活化用培養(yǎng)基的選擇

標(biāo)準(zhǔn)菌株的活化需使用非選擇性（不含任何抑菌成分），且營(yíng)養(yǎng)富集的培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基建議同時(shí)使用，固體培養(yǎng)基上更易觀察到菌種的形態(tài)、純度，液體培養(yǎng)基更利于菌種的復(fù)蘇和增殖，在特定條件下培養(yǎng)以優(yōu)化菌株的生長(zhǎng)和回收，常見菌種活化培養(yǎng)基見表1和表2。

表1常見菌種活化推薦使用固體培養(yǎng)基