菌落總數(shù)測定中的注意事項(xiàng)

檢測過程中的注意事項(xiàng)：

1、在GB 4789.2的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在平板計(jì)數(shù)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫需氧菌或兼性厭氧菌的菌落總數(shù)。

2、根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求和對(duì)樣品污染情況的估計(jì)，選擇2~3個(gè)稀釋度。加入樣品時(shí)要注意外來的污染。

3、為防止細(xì)菌增殖及產(chǎn)生片狀菌落，在加入樣液后，應(yīng)在15min內(nèi)傾注培養(yǎng)基。檢樣與培養(yǎng)基混勻時(shí)，可先向一個(gè)方向旋轉(zhuǎn)，然后再向相反方向旋轉(zhuǎn)。旋轉(zhuǎn)中應(yīng)防止混合物濺到皿邊的上方。

4、培養(yǎng)基傾注的溫度與厚度是實(shí)驗(yàn)正確與否的關(guān)鍵。（傾注的溫度：一般水浴和傾注溫度在46±1℃，溫度過高會(huì)造成已受損傷的菌細(xì)胞死亡，過低會(huì)導(dǎo)致瓊脂發(fā)生輕微凝固。厚度：直徑9cm的平皿一般要求15~20mL培養(yǎng)基，若培養(yǎng)基太薄，在培養(yǎng)過程中可能因水分蒸發(fā)而影響細(xì)菌的生長）。培養(yǎng)基凝固后，應(yīng)在盡快將平皿翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)，保持瓊脂表面干燥，盡量避免菌落蔓延生長，影響計(jì)數(shù)。

5、檢驗(yàn)過程中還應(yīng)該用稀釋液做空白對(duì)照，用以判定稀釋液、培養(yǎng)基、平皿或吸管可能存在的污染。同時(shí)，檢驗(yàn)過程中應(yīng)在工作臺(tái)上打開一塊空白的平板計(jì)數(shù)瓊脂，其暴露時(shí)間應(yīng)與檢驗(yàn)時(shí)間相當(dāng)，以了解檢樣在檢驗(yàn)過程中有無受到來自空氣的污染。

6、每種不同樣品中的細(xì)菌都有一定的生理特性，培養(yǎng)時(shí)應(yīng)用不同的營養(yǎng)條件及生理?xiàng)l件可能得出不同的結(jié)果，因而應(yīng)根據(jù)檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。

食品：36±１℃，48±2h 。

飲用水：36±１℃，48±2h 。

水產(chǎn)品（指原生態(tài)、未加工的水產(chǎn)品）：30±１℃，72±3h。(36℃培養(yǎng)和30℃培養(yǎng)結(jié)果差別較大，同樣水產(chǎn)品48h結(jié)果和72h也有差別。

7、有時(shí)檢樣的稀釋液中往往帶有食品顆粒（如奶粉、堅(jiān)果），在這種情況下，為避免與細(xì)菌菌落混淆，可作一檢樣對(duì)照將稀釋液與PCA混合，不經(jīng)培養(yǎng)，置4℃環(huán)境放置，在計(jì)數(shù)時(shí)用于對(duì)照。

另外也可以在已熔化而保溫在46±1℃水浴內(nèi)的平板計(jì)數(shù)瓊脂中，按100ml加1ml0.5%氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液，培養(yǎng)后食品顆粒不變色，細(xì)菌為紅色。

菌落計(jì)數(shù)注意事項(xiàng)：

1、如果高稀釋度平板上的菌落數(shù)比低稀釋度平板上的菌落數(shù)高，則說明檢驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)差錯(cuò)或樣品中含抑菌物質(zhì)，這樣的結(jié)果不可用于結(jié)果報(bào)告。

2、如果平板上出現(xiàn)鏈狀菌落，菌落間沒有明顯的界限，這可能是瓊脂與檢樣混勻時(shí)，一個(gè)細(xì)菌塊被分散所造成的。一條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)。若培養(yǎng)過程中遭遇昆蟲侵入，在昆蟲爬行過的地方也會(huì)出現(xiàn)鏈狀菌落，也不應(yīng)分開計(jì)數(shù)。

3、如果平板上菌落太多，不能計(jì)數(shù)時(shí)，不建議采用多不可計(jì)作報(bào)告?？梢栽谧罡呦♂尪绕桨迳先我膺x取2個(gè)1cm2的面積，計(jì)算菌落數(shù)，除2求出每cm2面積內(nèi)平均菌落數(shù)，乘以63.6(皿底面積cm2數(shù))。

4、如果檢樣是微生物類制劑（酸牛奶、酵母制酸性飲料等），在進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)將有關(guān)微生物（乳酸菌、酵母菌）排除，不可并入檢樣的菌落總數(shù)內(nèi)作報(bào)告。每個(gè)樣品從開始稀釋到傾注最后一個(gè)平板的時(shí)間不得超過15min,目的是為了使菌落能在平板上均勻分布，否則，時(shí)間放長了，樣液可能由于干燥而貼在平板上，傾注瓊脂后不易搖開，容易產(chǎn)生片狀菌落，影響菌落計(jì)數(shù)。另外，瓊脂凝固后不要在室溫長時(shí)間放置，應(yīng)及時(shí)將平皿倒置培養(yǎng)，可避免菌落的蔓延生長。