有些微生物是有利于研究人員做研究的,所以需要將這些微生物菌種好好的保存起來。保存這些微生物一般是運用的冷凍技術,首先需要對盛放微生物菌種的儀器進行殺菌和消毒處理,避免這種微生物與其他微生物混合在一起,飯后將培養(yǎng)皿放于低溫狀態(tài)下保存。
取0.1~0.2ml菌體懸浮液,移植于適宜的瓊脂斜面、平板培養(yǎng)基上,剩余的菌液,注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi),然后在建議的溫度下培養(yǎng)。若未能活化,或活化后有疑問時,請于收到菌種1個月內(nèi),通知保藏中心,經(jīng)查證無誤后,即免費補寄。
注意事項:菌種活化前,請將安瓿管保存在6一10℃的環(huán)境下。厭氧菌的培養(yǎng),如無特別說明,自開封至接種完成,均需以無氧氣體充填,以保持厭氧狀態(tài)。某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后,延遲期較長,需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長,此時請將步驟二重復一次。
液氮超低溫保藏程序:容器的選擇:使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。檢查安培瓶是否滲漏:用0.05%的亞甲基藍水溶液在4℃浸泡30-45分鐘,沖洗干凈,棄去含有藍色染料的安培瓶,其余的安培瓶備用。容器的滅菌:先用蒸餾水漂洗干凈安培瓶,再用蒸餾水在滅菌鍋中121℃浸泡滅菌15分鐘,干燥并將打印好的標簽放入安培瓶中,略擰緊螺旋蓋,再行121℃滅菌30分鐘。
保藏菌菌齡:處于最大生長量階段或?qū)?shù)生長期后期。保護劑:選用5-10%的甘油或二甲基亞砜作保護劑。甘油的準備:在121℃滅菌15分鐘,2-8℃貯存。甘油一般以兩倍最終所需濃度的水溶液保存,然后與同等量的細胞懸液混合。若不用細胞懸液,則以最終所需濃度的水溶液保存。
二甲基亞砜:用0.22um的聚四氟乙烯過濾膜過濾除菌。過濾膜預先用甲醇和二甲基亞砜漂洗。無菌的二甲基亞砜以10-15ml裝量2-8℃避光保存。分裝:在無菌條件下,將細胞懸液分裝于安培瓶中,并注入保護劑,擰緊螺旋蓋。