不同級(jí)別菌株定義及注意事項(xiàng)

一、標(biāo)準(zhǔn)菌株：

官方菌種保藏機(jī)構(gòu)買到的0代菌株為標(biāo)準(zhǔn)菌株，它是根據(jù)菌株特性至少定義到屬或種的水平的菌株。我們經(jīng)常使用的標(biāo)準(zhǔn)菌株來自于兩大菌種保藏中心：

其一為中國(guó)藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)菌種保藏中心（CMCC），它提供冷凍干燥菌種（0代）及保存于凍存管中的黑曲霉0代孢子懸液菌種。

CMCC（B）代表細(xì)菌（bacteria）

CMCC（F）代表真菌（fungi）

其二為美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)（ATCC），ATCC的菌株則需有相應(yīng)的文件來證明ATCC的菌株特性與CMCC是等效的。要注意的是從省市藥檢所買到的標(biāo)準(zhǔn)菌株，不是0代的，需問清購(gòu)買到的是第幾代菌株。

二、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏菌株：

標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過復(fù)蘇、復(fù)壯并采用適宜的方法保存得到的菌種，即為標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株。一般為標(biāo)準(zhǔn)菌株傳代1-2次而得。

三、工作菌株：

標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株再傳代培養(yǎng)得到的菌株即為工作菌株；平常試驗(yàn)用菌株為工作菌株。

四、注意事項(xiàng)：

1工作菌株是不可以從冰箱中取出直接使用的，需在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行活化；

2從標(biāo)準(zhǔn)菌株到實(shí)驗(yàn)使用的菌懸液的傳代次數(shù)應(yīng)不得超過5代，以防止過度的傳代增加菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)。在2015版藥典“9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”中明確指出：任何形式的轉(zhuǎn)種均被認(rèn)為是傳代1次。

3標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)蘇后的一代，一般是不保存的，因?yàn)榫N剛剛從凍干粉的狀態(tài)復(fù)蘇，活性還未恢復(fù)到最佳狀態(tài)，再?gòu)?fù)壯而得的二代菌種，也就是標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株，需進(jìn)行純度和特性的確認(rèn)，這個(gè)確認(rèn)記錄可證明在操作過程中，菌株未污染雜菌且活性與標(biāo)準(zhǔn)菌株一致。

4保藏時(shí)應(yīng)選擇適宜的菌種保存方法，并注意標(biāo)示必須清晰明確。由于在試驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)菌種的活性和特性依賴于合適的試驗(yàn)操作和貯藏條件，大家也越來越重視實(shí)驗(yàn)菌種的狀態(tài)，如果保藏方法及管理不善，菌種優(yōu)良特性便會(huì)退化、喪失，甚至導(dǎo)致死亡，就會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

五、倍增時(shí)間：

倍增時(shí)間不是代數(shù)，倍增時(shí)間是菌株特性，不同菌株起菌快慢不一樣，具體工藝需要結(jié)合倍增時(shí)間、培養(yǎng)基及生長(zhǎng)曲線等進(jìn)行設(shè)計(jì)

對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞的生長(zhǎng)速率快速拉升，期間微生物的比生長(zhǎng)速率最大，且菌體生長(zhǎng)不受基質(zhì)濃度限制，繁殖速率極快，細(xì)胞數(shù)量或質(zhì)量等生物量一般呈指數(shù)增長(zhǎng)，根據(jù)比生長(zhǎng)速率定義有：

μ=dCX/dt?1/CX

積分變形可得：

lnCX1=lnCX0+μ?t

繼續(xù)變形：

μ?t=（lnCX1－lnCX0）

則倍增時(shí)間td：

= lnCX1－lnCX0 /μmax

= ln（2/1） /μmax

=0.693/μmax

其中：

μ：比生長(zhǎng)速率

CX0：起始菌體濃度（g/L）