一、標(biāo)準(zhǔn)菌株:
官方菌種保藏機(jī)構(gòu)買到的0代菌株為標(biāo)準(zhǔn)菌株,它是根據(jù)菌株特性至少定義到屬或種的水平的菌株。我們經(jīng)常使用的標(biāo)準(zhǔn)菌株來自于兩大菌種保藏中心:
其一為中國(guó)藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)菌種保藏中心(CMCC),它提供冷凍干燥菌種(0代)及保存于凍存管中的黑曲霉0代孢子懸液菌種。
CMCC(B)代表細(xì)菌(bacteria)
CMCC(F)代表真菌(fungi)
其二為美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)(ATCC),ATCC的菌株則需有相應(yīng)的文件來證明ATCC的菌株特性與CMCC是等效的。要注意的是從省市藥檢所買到的標(biāo)準(zhǔn)菌株,不是0代的,需問清購(gòu)買到的是第幾代菌株。
二、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏菌株:
標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過復(fù)蘇、復(fù)壯并采用適宜的方法保存得到的菌種,即為標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株。一般為標(biāo)準(zhǔn)菌株傳代1-2次而得。
三、工作菌株:
標(biāo)準(zhǔn)貯備菌株再傳代培養(yǎng)得到的菌株即為工作菌株;平常試驗(yàn)用菌株為工作菌株。
四、注意事項(xiàng):
1工作菌株是不可以從冰箱中取出直接使用的,需在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行活化;
2從標(biāo)準(zhǔn)菌株到實(shí)驗(yàn)使用的菌懸液的傳代次數(shù)應(yīng)不得超過5代,以防止過度的傳代增加菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)。在2015版藥典“9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”中明確指出:任何形式的轉(zhuǎn)種均被認(rèn)為是傳代1次。
3標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)蘇后的一代,一般是不保存的,因?yàn)榫N剛剛從凍干粉的狀態(tài)復(fù)蘇,活性還未恢復(fù)到最佳狀態(tài),再?gòu)?fù)壯而得的二代菌種,也就是標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株,需進(jìn)行純度和特性的確認(rèn),這個(gè)確認(rèn)記錄可證明在操作過程中,菌株未污染雜菌且活性與標(biāo)準(zhǔn)菌株一致。
4保藏時(shí)應(yīng)選擇適宜的菌種保存方法,并注意標(biāo)示必須清晰明確。由于在試驗(yàn)過程中,實(shí)驗(yàn)菌種的活性和特性依賴于合適的試驗(yàn)操作和貯藏條件,大家也越來越重視實(shí)驗(yàn)菌種的狀態(tài),如果保藏方法及管理不善,菌種優(yōu)良特性便會(huì)退化、喪失,甚至導(dǎo)致死亡,就會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
五、倍增時(shí)間:
倍增時(shí)間不是代數(shù),倍增時(shí)間是菌株特性,不同菌株起菌快慢不一樣,具體工藝需要結(jié)合倍增時(shí)間、培養(yǎng)基及生長(zhǎng)曲線等進(jìn)行設(shè)計(jì)
對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞的生長(zhǎng)速率快速拉升,期間微生物的比生長(zhǎng)速率最大,且菌體生長(zhǎng)不受基質(zhì)濃度限制,繁殖速率極快,細(xì)胞數(shù)量或質(zhì)量等生物量一般呈指數(shù)增長(zhǎng),根據(jù)比生長(zhǎng)速率定義有:
μ=dCX/dt?1/CX
積分變形可得:
lnCX1=lnCX0+μ?t
繼續(xù)變形:
μ?t=(lnCX1-lnCX0)
則倍增時(shí)間td:
= lnCX1-lnCX0 /μmax
= ln(2/1) /μmax
=0.693/μmax
其中:
μ:比生長(zhǎng)速率
CX0:起始菌體濃度(g/L)
CXt:經(jīng)過一段時(shí)間t后的菌體濃度(g/L)
CX:菌體濃度泛指(g/L)
td:菌體濃度增大一倍時(shí)所需要的時(shí)間min
不同微生物的倍增時(shí)間不一,常見微生物td見下表:
